分光光度計已在藥檢、醫(yī)療衛(wèi)生、化學化工、環(huán)保地質(zhì)、冶金、石油、食品、生命科學、材料科學、農(nóng)業(yè)科學等各個領(lǐng)域的科研、生產(chǎn)中 , 得到廣泛的應用。在定量分析、純度檢查方面更是的分析儀器。從事分光光度計計量檢定幾年來, 發(fā)現(xiàn)分光光度計使用中存在一些應注意的問題。
1 應注意待測溶液濃度過高(即吸光度太大)或過低(即吸光度太小)對測試結(jié)果準確性的影響在實際工作中, 用分光光度計測溶液時, 被測溶液濃度太高或太低都能產(chǎn)生比耳定律的偏離 ,從而使吸光度(透射比)誤差變大 。吸光度(透射比)誤差越大, 測量結(jié)果的可信性就越差。例如 :設(shè)某試樣的濃度為 C ,則由朗
伯—比爾定律: A =-1gT =εbc (1)式中 :A —物質(zhì)的吸光度;T —物質(zhì)的透光率 ;ε—物質(zhì)的吸光系數(shù);b —被分析物質(zhì)的光程;c—物質(zhì)的濃度。
將(1)式微分 ,
則 :
-d1gT =0.434d1nT =-0.434dT =εbc (2)
(1)式除(2)式 ,則:
dc = -0.434 =dT (3)
c T1gT
將(3)式以有限式表示 ,則:
c = -0.434 T (4)
c T 1gT
(4)式中 c 為濃度相對誤差, T 為透光度誤差。
一般分光光度計的 T 約為 ±0.2 %～ ±2.0 %。若按目前大多數(shù)分光光度計廠家標準的規(guī)定, 取 T = 0.5 %,代入(4)式 ,則計算出不同透光率或不同吸光度值的濃度相對誤差由表 1 可知, 濃度測量的相對誤差大小和吸光度值所處的范圍關(guān)系很大。因此在測樣中 , 選擇適當?shù)奈舛确秶浅Ｖ匾Ｄ壳胺止夤舛扔嬍褂谜咚褂玫?721 、722 、723 、752 、756 等分光光度計的吸光度線性動態(tài)范圍都很小, 有的在(0.2 ～ 0.9)A 左右, 因此分光光度計的使用者應注意通過改變吸收池厚度或待測樣的濃度 , 使被測吸光度讀數(shù)在儀器的吸光度線性動態(tài)范圍內(nèi) ,從而減小比耳定律的偏離 ,得到較準確的測量結(jié)果。2 應注意儀器“0”點和基線的校準對測試結(jié)果準確性的影響儀器“0”點的校準主要針對可見分光光度計中,“0”點和“100 %”點分開調(diào)校的儀器。有些分光光度計使用者在用分光光度計測樣時, 當大幅度改變波長時 ,會稍等片刻,等燈熱平衡后 , 重新校準“100 %” 點, 而忽視“0”點的重新校準。其實在大幅度改變波長重新校準“100 %” 點后,“0”點的數(shù)值也改變了, 如果不進行“0”校準 ,“0”點的數(shù)值將直接影響測試結(jié)果的準確性。正確做法應在大幅度改變波長后 , 先重新校準“100 %”點再重新校準“0”點然后測樣。
基線的校準主要針對帶全波長掃描功能的分光光度計。當分光光度計使用者使用波長掃描功能對樣品測試、分析時(尤其當被測樣品濃度較小時), 就必須注意儀器基線的好壞對測試結(jié)果的影響。因為當基線偏離吸光度“0A”以下時(即發(fā)生負偏), 如果掃描分析的樣品濃度較小 ,吸光度峰值比較低 ,可能就檢測不出樣品值 ,從而影響到測試結(jié)果。所以在測量前應進行基線校準(以空氣為參比樣)。而在基線校準后怎樣判斷基線是否校準成功,方法如下:首先選擇波長掃描功能, 在掃描參數(shù)設(shè)置中 :將掃描模式為 :A(即吸光度), 吸光度量程將掃描速度設(shè)為:中速;波長范圍設(shè)為 :實際需要波長范圍;取樣間隔:1nm ;儀器光譜帶寬 2nm (無光譜帶寬調(diào)整擋的儀器不設(shè))。
