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關(guān)鍵字：Streptozocin  鏈脲佐菌素 stz  Streptozotocin  鏈脲霉素  糖尿病動(dòng)物模型

STZ 誘發(fā)糖尿病動(dòng)物模型的原理

       STZ對(duì)一定種屬動(dòng)物的胰島β細(xì)胞有選擇性破壞作用，能誘發(fā)許多動(dòng)物產(chǎn)生糖尿病，一般采用大鼠和小鼠制造動(dòng)物模型。國外有學(xué)者報(bào)道選用雄性大鼠制造模型的成模率明顯高于雌性大鼠。1型糖尿病與2型糖尿病動(dòng)物模型的制備與STZ注射的劑量有關(guān)系：大劑量注射時(shí)，由于直接引起胰島β細(xì)胞的廣泛破壞，可造成1型糖尿病模型；而注射較少量STZ時(shí)，由于只是破壞一部分胰島β細(xì)胞的功能，造成外周組織對(duì)胰島素不敏感，同時(shí)給予高熱量飼料喂養(yǎng)，兩者結(jié)合便誘導(dǎo)出病理、生理改變都接近于人類2型糖尿病的動(dòng)物模型。

造模前的喂養(yǎng)

      Ⅰ型糖尿病模型成模比較快，通常大鼠在普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后即可開始造模

      Ⅱ型糖尿病模型：高脂飲食誘導(dǎo)加小劑量STZ。造模前喂以高脂（高糖）飼料，誘發(fā)出胰島素抵抗。

高脂（高糖）飼料

      高脂（高糖）飼料成分：其中含10%蔗糖，10%豬油，5%膽固醇

      由基礎(chǔ)鼠飼料加蔗糖、煉豬油和蛋黃按比搭配制作高脂高糖飼料：其比例為豬油18 % ,蔗糖20 % ,蛋黃3 % ,基礎(chǔ)飼料59 %。

預(yù)實(shí)驗(yàn)的重要性

      很重要。實(shí)驗(yàn)時(shí)STZ的給藥量應(yīng)參照預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，盡量不要盲目按照文獻(xiàn)上或他人的給藥量來直接使用，鼠均重和空腹（低糖狀態(tài)）抗藥力、禁食時(shí)長、注射選時(shí)、以及之前飼養(yǎng)過程、測(cè)糖選時(shí)等都不相同，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定符合自己實(shí)驗(yàn)鼠的給藥計(jì)量，才是zui科學(xué)的。

常用給藥劑量

     Ⅰ型糖尿病模型：大鼠劑量為70～65mg/Kg

     Ⅱ型糖尿病模型：高糖高脂喂養(yǎng)1～2 個(gè)月的大鼠,STZ 劑量在25～40mg/Kg

     或參考文獻(xiàn)（鼠均重不同，本劑量以200克均重為例）。

配置STZ溶液

      檸檬酸緩沖液的配制：

      檸 檬 酸（FW:210.14） 2.1g加入雙蒸水100mL中配成A液

      檸檬酸鈉（FW:294.10）2.94g加入雙蒸水100mL中配成B液

      鏈脲佐菌素配制液：用時(shí)將A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），PH計(jì)測(cè)定ph值,調(diào)節(jié)ph=4.2-4.5,即是所需配置STZ的檸檬酸緩沖液。

      注射時(shí)用檸檬酸緩沖液以1%的濃度溶解STZ，按空腹體重注射相應(yīng)的STZ，  在30分鐘內(nèi)注射完畢。注意： STZ容易失活, STZ快速稱取后仍要求干燥避光，推薦用干燥鋁箔（或錫箔）紙。

禁食和血糖的

      禁食12小時(shí)以上（一般過夜禁食，不禁水）。禁食的時(shí)間越長，STZ對(duì)胰島β細(xì)胞的破壞力越明顯，即藥效越高。所以相對(duì)禁食時(shí)間延長，可以降低STZ的用量。

腹腔注射和尾部注射的區(qū)別

      尾部注射即靜脈注射，藥物利用率較高，同比腹腔注射，可以節(jié)省藥量，缺點(diǎn)是操作起來不如腹腔注射方便。

注射前操作步驟

      過夜禁食后稱重，按大鼠總重量比稱取STZ，放一干燥滅菌瓶內(nèi)，外用錫紙包好，將檸檬酸緩沖液及裝STZ的瓶子置冰浴，一起帶到動(dòng)物房，如果注射操作技術(shù)不熟練,應(yīng)兩組交替注射，建議分組溶解STZ，比如10只或15只鼠/組。

注射時(shí)，推進(jìn)速度和血糖的關(guān)系

      推注的速度快，更容易形成高血糖，推注的速度慢，相對(duì)的危險(xiǎn)性較低，但也不容易成模，常規(guī)操作中多要求快速注射。當(dāng)然，STZ的劑量是決定血糖高低的主要因素。

死鼠問題的解決

      鼠的個(gè)體差別和空腹（低血糖）抵抗力的差異而致死亡率的不同，開始死亡率高可能主要是血糖突然升高,鼠不適應(yīng),或發(fā)生了DKA（即酮癥酸中毒）。

      首先，一定要保證足夠的飲水量（飲水量不足容易導(dǎo)致死鼠）;

      其次，高血糖和低血糖都會(huì)造成死鼠，避免死鼠可以通過注射胰島素或暫時(shí)補(bǔ)糖，兩種途徑： 1、常見為血糖過高。補(bǔ)胰島素法，補(bǔ)一些中效胰島素。例如給諾和靈n或NPH（中性魚精蛋白鋅胰島素）,每次2--3個(gè)單位,過了3-5天，大鼠一般死亡率就低了；2、補(bǔ)糖法，禁食后的鼠，注射的時(shí)候已經(jīng)處于低血糖狀態(tài)，造模4小時(shí)后腹腔注射百分之20的葡萄糖，可避免因注射時(shí)血糖過低死鼠;

再次，防止動(dòng)物自相殘殺。食物缺乏和供水不足的情況下，會(huì)互相撕殺、啃食同類,所以食物和飲水要供應(yīng)充足,是兩路供應(yīng);

zui后，防止感染。糖尿病大鼠尿量多，墊料潮濕，需要勤換墊料，所以糖尿病大鼠較其他大鼠容易出現(xiàn)感染，特別是泌尿道感染和腹腔感染。腹腔注射、皮下注射及采血測(cè)血糖等侵入性操作前后，要注意消毒工作。如每次采血測(cè)血糖后可用四環(huán)素（或金霉素眼藥膏）局部涂抹處理傷口預(yù)防感染。

模型不*，三天后補(bǔ)注STZ（以10mg-20mg/kg體重劑量腹腔注射），也很容易成模，或讓血糖恢復(fù)正常后再常規(guī)劑量注射;但要達(dá)到理想的效果，往往是恢復(fù)到正常狀態(tài)下重新造模。

STZ的保存方法

      −20°C，干燥避光保存。（注：本品易潮解,如需反復(fù)取量過程中，應(yīng)避免接觸其受水受潮，受潮后30分鐘后失效，這和注射時(shí)要求其快速注射是一個(gè)道理，即其水溶液不穩(wěn)定）。

多次稱取STZ時(shí)的操作方法和注意事項(xiàng)

如確實(shí)需要多次稱取，要嚴(yán)格按照避免受潮的原則操作和存放。

操作方法

操作環(huán)境、盛裝容器、分裝工具都必須保證干燥。無需冰浴，分裝后用封口膜密封瓶口，用鋁箔紙（或錫箔，即避光）將瓶子包好，放入干燥罐里（干燥劑，即保持干燥狀態(tài)）， 并－20℃冷藏，可長期保存。本品保質(zhì)期為2年半。