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公司動態(tài)
外周血中嗜堿性粒細(xì)胞分離方法
點擊次數(shù)：730 發(fā)布時間：2009-2-9
Percoll密度梯度離心分離法：
1、Pcrcoll混懸液的配制：Percoll 90ml,HBSS 9ml, HEPES(0.25mol/l)1ml(PH 7.3),HCL(1mol/l)0.4ml 調(diào)節(jié)至PH7.4
2、制備Percoll密度梯度管
密度 Percoll/HBSS(ml/ml)
1.070 24:20
1.079 27:15.9
1.088 23:10
3、加分層液的順序：底層先加4ml 1.088g/mlPercoll液，第二層加4Ml1.079g/mlPercoll液，嘴上曾加3ml 1.070g/ml的Percoll液，制成3個密度梯度管，用于分離堿性粒細(xì)胞。
4、將新鮮的抗凝血（用0.1mol/lEDTA PH 7.7抗凝）按等體積加于Percoll密度梯度分層液上，室溫下1200r/min離心25分鐘。
5、將每一細(xì)胞層分別吸出各放于1支試管內(nèi)，加無Ca,Mg離子的Hanks液在4度下洗滌3次，每次1200r/min,離心10分鐘棄去上清。
6、將分別得到的各層細(xì)胞涂片，固定后用Wright-Giemsa染液染色，在顯微鏡下檢查嗜堿性粒細(xì)胞（大多數(shù)在中間層，但不同個體嗜堿性粒細(xì)胞的密度不同，因此可能會出現(xiàn)在其他細(xì)胞層），嗜堿性粒細(xì)胞染成紫紅色。