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閱讀：1298發(fā)布時(shí)間：2009-11-27
近年來對多糖的研究在分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域愈來愈引起人們的重視通過對天然植物中多糖的提取分離改造提高活性親和性特異性和生物利用度使得這一高分子聚合物在生命科學(xué)領(lǐng)域的研究有了重大進(jìn)展例如*在醫(yī)學(xué)上作為免疫調(diào)節(jié)劑來治療腫瘤肝炎等疾病[1]大豆多糖的提取方法為大豆水溶液提取精制濃縮干燥大豆多糖[2]無論是在天然植物中提取分離精制多糖的生產(chǎn)工藝中還是在多糖的應(yīng)用研究中對多糖的分析方法是必需的概括起來糖的分析方法主要有四種（1）化學(xué)分析法[3]該方法只能測定出總糖和還原糖的含量無法測定出不同種類糖的含量和定性分析而且樣品具有顏色或其它還原性物質(zhì)時(shí)對分析結(jié)果的準(zhǔn)確度影響很大用于多糖的生產(chǎn)工藝及應(yīng)用研究中不夠理想（2）紙層析或板層析法[3] 該方法在定性定量分析上也不夠理想（3）液相色譜法[3]采用胺基柱示差折光檢測器乙晴水=70:30（體積比）為流動(dòng)相測定多糖是一種較理想的方法但儀器昂貴分析費(fèi)用較高不利于普及（4）氣相色譜法[4]以往的方法是以吡啶為溶劑將糖衍生化為揮發(fā)性*基硅醚衍生物然后進(jìn)行氣相色譜分析而氣相色譜法中使用吡啶為溶劑時(shí)存在著吡啶毒性較大危害環(huán)境和分析工作者健康吡啶極性大使溶劑峰拖尾造成定量不夠準(zhǔn)確要求無水操作及樣品在吡啶中難溶解使操作繁瑣等缺點(diǎn)本文討論了以二甲基亞砜和環(huán)乙烷為溶劑以六甲基二硅氨烷和*基氯硅烷為衍生化試劑以環(huán)己烷為萃取劑用衍生化-萃取法處理多糖樣品采用填充柱氣相色譜法測定了大豆提取液中的多糖含量
1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 儀器與試劑
GC-16A 氣相色譜儀（島津）色譜柱為F3mm 1m 玻璃柱（島津） 固定相為Shimalite W（60-
80 目）涂OV-17 固定液液擔(dān)比為1.5%（日本信和化工株式會社） 環(huán)乙烷二甲基亞砜六甲
基二硅氨烷*基氯硅烷肌醇阿戊糖鼠李糖果糖蔗糖棉籽糖水蘇糖均為分析
純試劑
1.2 標(biāo)準(zhǔn)樣品的配制
（各物質(zhì)的質(zhì)量均折成100%計(jì)）糖標(biāo)準(zhǔn)樣依次取蔗糖棉籽糖水蘇糖各500mg 左右（稱
準(zhǔn)到0.001g）于100mL 容量瓶中加水溶解并定容到刻度每次取2.0mL 分別置于25 支5mL 的
具塞比色管中在真空度為0.09MPa 溫度為60°C 蒸發(fā)至干以每組5 支比色管分成五組備用
二甲基亞砜標(biāo)準(zhǔn)樣取500mg 肌醇（稱準(zhǔn)到0.001g）于100mL 容量瓶中加入二甲基亞砜溶解并
定容到刻度配成含肌醇5mg/mL 的二甲基亞砜標(biāo)準(zhǔn)樣
1.3 色譜條件
進(jìn)樣溫度為320°C 檢測器（FID）溫度為300°C 柱溫120°C（保持1min）升溫到330°C（保持
8min）,升溫速率為20°C/min N2 為載氣（40mL/min） 進(jìn)樣為1.0mL
1.4 *衍生化-萃取條件的確定
在室溫下取上述三組標(biāo)樣依次加入1.0mL 二基亞砜標(biāo)準(zhǔn)液1.0mL 環(huán)己烷
1.4.1 衍生化試劑用量對拖尾峰（tailing peak）。前者少見。>色譜峰面積的影響取*組標(biāo)樣依次加入衍生化試劑2.42.7 3.0
3.3 3.6mL V（六甲基二硅氨烷）:V（*基氯硅烷）=2:1 振蕩時(shí)間為10min 靜止時(shí)間為1h 依
次進(jìn)樣測定色譜基線構(gòu)成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積
1.4.2 靜止時(shí)間對色譜峰面積的影響 取第二組標(biāo)樣依次加入衍生化試劑3.0mL 振蕩時(shí)間為
10min 靜止時(shí)間分別為30 40 50 60 70min 依次進(jìn)樣測定色譜峰面積
1.4.3 振蕩時(shí)間對色譜峰面積的影響 取第三組標(biāo)樣依次加入衍生化試劑3.0mL 振蕩時(shí)間分
別為4 6 8 10 12min 靜止時(shí)間為1h 依次進(jìn)樣測定色譜峰面積
由以上單因素影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知當(dāng)衍生化試劑用量為2.7mL 以上時(shí)靜止時(shí)間為40min
以上時(shí)振蕩時(shí)間為8min 以上時(shí)樣品中各組分的色譜峰面積達(dá)到zui大值因此*衍生化
萃取條件確定為衍生化試劑用量為3.0mL V（六甲基二硅氨烷）:V（*基氯硅烷）=2:1 靜止時(shí)
間為50min 振蕩時(shí)間為10min 取上層液進(jìn)樣1.0mL
1.5 定性定量方法
已知物對照法定性內(nèi)標(biāo)法（肌醇為內(nèi)標(biāo)物）定量
2 結(jié)果與討論
2.1 相對校正因子保留時(shí)間和方法回收率的測定與計(jì)算
分別取第四五組糖標(biāo)樣衍生化后進(jìn)樣三次取平均值分別計(jì)算各組分的相對校正因子保留時(shí)間和回收率肌醇蔗糖棉子糖水蘇糖的保留時(shí)間分別為5.888.39 10.99 14.51min相對校正因子分別
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