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《海參中海參多糖的測定高效液相色譜法》國家標(biāo)準(zhǔn)征求意見

2021-10-15 08:54:37 來源：儀表網(wǎng) 閱讀量：8247

　　根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)國家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃，由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口的《海參中海參多糖的測定高效液相色譜法》(計(jì)劃號(hào)：20205073-T-424)國家標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)已形成征求意見稿，按照《國家標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》的有關(guān)規(guī)定，現(xiàn)向社會(huì)各界公開征求意見。

　　海參(sea cucumber)，屬棘皮動(dòng)物門(Echinodermata)，海參綱(Holothurioider)，是棘皮動(dòng)物中經(jīng)濟(jì)價(jià)值最大的一綱。海參約有 1100 多種，我國有 100 多種，可供食用的有 20多種，其中以仿刺參的品質(zhì)和口感最佳。海參含有蛋白質(zhì)、多糖、微量元素和維生素等多種營養(yǎng)物質(zhì)，已經(jīng)作為功能食品而被引起關(guān)注。更重要的是，它們含有大量的生物活性物質(zhì)如海參皂甙、粘多糖和膠原蛋白等，具有潛在的醫(yī)藥應(yīng)用價(jià)值。

　　海參多糖作為主要的活性成分，其含量對其食用及藥用價(jià)值影響很大，是不可或缺的海參營養(yǎng)評價(jià)指標(biāo)。海參中多糖類化合物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，且因海參種類和生長環(huán)境的不同而有差別。不同種類海參中的多糖結(jié)構(gòu)不同，而不同產(chǎn)地的同種海參中海參巖藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)和海參硫酸軟骨素(SC-CHS)的含量也不盡相同。另外，海參中蛋白質(zhì)、多糖、脂肪、微量元素等復(fù)雜成分的存在，會(huì)給海參多糖的測定帶來很多困難，采用簡單的分光光度法或稱重法很難滿足以海參多糖為評價(jià)指標(biāo)建立海參制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。因此，制訂簡單可信的海參多糖的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義和緊迫性。

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了海參及以海參為原料加工而成的干海參、即食海參、膠囊、漿液等深加工制品中海參多糖含量的高效液相色譜測定方法的范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、結(jié)果計(jì)算與表示、精密度。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于海參及以海參為原料加工而成的干海參、即食海參、膠囊、漿液等深加工制品中海參多糖含量的測定。

　　下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法；GB/T 8855 水果和蔬菜取樣方法。

　　方法原理：

　　樣品經(jīng)酶解、乙酸鉀沉淀、酸解后制備得到海參硫酸軟骨素水解液，水解液中巖藻糖與 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)進(jìn)行衍生反應(yīng)，XDB-C18 色譜柱分離，經(jīng)配有紫外檢測器的高效液相色譜儀測定巖藻糖衍生物的含量，內(nèi)標(biāo)法定量，以巖藻糖含量為基準(zhǔn)計(jì)算出樣品中海參多糖的含量。

　　儀器和設(shè)備：

　　1.高效液相色譜儀：配紫外檢測器。2.天平：感量0.01g。3.分析天平：感量0.0001g。4.離心機(jī)：15000 r/min。5.電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。6.超聲波清洗儀。7.渦旋混合器。8.恒溫水浴鍋。9.恒溫水浴振蕩器。10.氮吹儀。11.pH 計(jì)。12.微量移量移液槍及配套槍頭。13.小型粉碎機(jī)。

　　測定步驟：

　　樣品的前處理：

　　鮮海參去腸腺、灰嘴，剪成 0.5 cm×0.5 cm 的小塊，70 ℃烘干 12 h，粉碎，過10目篩，混勻備用；干海參，粉碎，過 10 目篩，混勻備用；即食海參，剪成 0.5cm×0.5cm 的小塊，70 ℃烘干 12 h，粉碎，過 10 目篩，混勻備用；膠囊，取內(nèi)容物混勻備用；漿液，混勻備。

　　結(jié)果表示：

　　測定結(jié)果以平均測定的算術(shù)平均值表示，計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。兩次平行測定結(jié)果的相對平均偏差不應(yīng)超過10%。

　　本標(biāo)準(zhǔn)方法的優(yōu)點(diǎn)在于：

　　(1)靈敏度高，巖藻糖衍生物在 254 nm 有很強(qiáng)的吸收，濃度為8.0×10-4 mg/mL 時(shí)即可實(shí)現(xiàn)定量檢測。(2)穩(wěn)定性好，24 小時(shí)內(nèi)巖藻糖衍生物峰面積穩(wěn)定，RSD≤5%。(3)分離效果好，在此高效液相色譜條件下，巖藻糖能夠與其它單糖明顯分離，有效避免其它單糖對巖藻糖的檢測帶來的干擾，實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定量。(4)適用范圍較廣，可應(yīng)用于固態(tài)、液態(tài)等多種刺參制品中海參多糖含量的測定。(5)本方法能有效排除市場上向刺參制品中摻入其它來源多糖而干擾海參多糖準(zhǔn)確定量的問題。

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